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紫外可見分光光度計聚乙二醇?xì)埩袅繙y定法
更新時間:2016-05-16 點擊次數(shù):6432

聚乙二醇?xì)埩袅繙y定法

本法系依據(jù)聚乙二醇與鋇離子和碘離子形成復(fù)合物

( 1 : 1 ) ,用比色法測定聚乙二醇含量。

測定法取供試品適量,用水稀釋,使蛋白質(zhì)濃度不

高于1%,即為供試品洛液。精密量取供試品溶液1.0ml,

加入0. 5mol/L高氯酸溶液5.0ml,混勻,室溫放置1 5

鐘,以每分鐘4000轉(zhuǎn)離心1 0分鐘。取上清液4ml,加人

氯化鋇溶液(稱取氯化鋇5g,加水溶解至100ml) 1.0ml

O.lmol/L碘溶液(稱取碘化鉀2.0g,加少量水溶解,

然后加碘1.3g,再加水至50ml,搖勻)0.5ml,混勻,室

溫反應(yīng)1 5分鐘,照紫外-可見分光光度法(通則0401) ,

在波長53 5 n m處測定吸光度;同時以lml水代替供試品

溶液,同法操作,即為空白對照。

另精密稱取與供試品中聚乙二醇分子量相同的聚乙二

醇適量,加水溶解,并制成每lml含聚乙二醇lOOpg的溶

液,即為聚乙二醇對照品貯備液。

取按下表制備的每lml10?50Mg 的聚乙二醇對照

品溶液1_ 0ml,加人0. 5mol/L髙氯酸溶液5.0ml,混勻,

室溫放置15分鐘起,同法操作。

聚乙二醇含量/M g • m l - 1 10 20 30 40 50

聚乙二醇對照品貯備液/ml 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0

約1 % 蛋白質(zhì)溶液/ml 0. 2 0. 2 0. 2 0. 2 0, 2

水/ml 1. 6 1. 4 1.2 1.0 0. 8

以聚乙二醇對照品溶液的濃度h g / m l ) 對其相應(yīng)的

吸光度作直線回歸,將供試品溶液吸光度代人直線回歸方程,計算出供試品溶液中聚乙二醇含量F (yg/ml)。

按下式計算:

供試品聚乙二醇含量(g/L) - F X n X 1 0 ~ 3

式中F 為供試品溶液中聚乙二醇含量,pg/ml;

^ 為供試品稀釋倍數(shù)。

【附注】1 ) 整個比色過程應(yīng)在試劑加人后的15?45

分鐘內(nèi)完成,否則將要影響結(jié)果。

(2) 本法的靈敏度隨被測聚乙二醇的分子量的增加而

提高。

(3) 1%的蛋白質(zhì)溶液系用不含聚乙二醇的蛋白質(zhì)溶

液配制。

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